Il metodo presenta una procedura di estrazione efficiente basata sull'estrazione liquido-liquido (LLE) che fornisce un recupero elevato e costante per entrambi gli analiti. L'effetto matrice è stato accuratamente valutato stimando i fattori di matrice normalizzati IS anche attraverso l'infusione dell'analita dopo la colonna. Il metodo LC-MS/MS sviluppato per la quantificazione di ART, DHA, LF e DLF nel plasma umano è stato completamente validato secondo le linee guida della FDA statunitense. Il metodo proposto è sensibile per entrambi gli analiti rispetto a tutti gli altri metodi presentati sia come singolo analita che in combinazione in diverse matrici biologiche. Il metodo offre vantaggi significativi rispetto a quelli precedentemente riportati, in termini di minore necessità di campioni per l'analisi, semplicità della procedura di estrazione e tempo complessivo di analisi. L'assenza di interferenze della matrice è efficacemente dimostrata dall'infusione postcolonna e dai valori di precisione (% CV) per le pendenze calcolate delle curve di calibrazione. Il metodo validato ha mostrato dati accettabili per tutti i parametri di validazione, con sensibilità e selettività adeguate per la loro quantificazione simultanea in ambito clinico.