L¿objectif principal du présent travail est le criblage de bactéries hydrocarbonoclastes productrices de biosurfactant à partir des eaux de production pétrolière du champ Sidi LITAYEM. Le criblage a permis d¿isoler deux souches bactériennes B17 et S7 dotées de fortes capacités à produire des biosurfactants sur deux sources de carbones différentes (l¿huile d¿olive et l¿huile de moteur). Ces résultats ont été confirmés par les mesures des pourcentages de l¿activité émulsifiante et des diamètres de déplacement d¿huile. En effet, des E24 de l¿ordre de 44 % et 33 % et des diamètres égaux à 5,4 et 5 cm ont été obtenus par les biotensioactifs produits par les souches B17 et S7 respectivement. L¿étude de la stabilité des biosurfactants vis-à-vis de la température, du pH et de la salinité, a montré que le biosurfactant B17 est plus stable à des températures élevées jusqüà 100 °C et s¿est avéré résistant à l¿hypersalinité (100 g/L) et à l¿acidité du milieu (pH = 4). L¿étude des activités biologiques a révélé que les biosurfactants B17 et S7 présentent une activité antibactérienne relativement bonne contre les différentes souches pathogènes et phytopathogènes testées avec des CMI de 4,993 m.