170 actinobactéries ont été isolés à partir de 36 échantillons de sols provenant de la région de Boulimat (Béjaia) et de Tikjda (Bouira). Deux isolats désignés TKJ2 et P1NG ont été sélectionnés pour leurs activités antifongiques. La séquence nucléotidique d'ADNr 16S (1454 pb) de l'isolat TKJ2 présente 99% de similitude avec l'ADNr 16S de plusieurs espèces du genre Streptomyces. De même la séquence nucléotidique d'ADNr 16S (1191pb) de l'isolat P1NG présente 100% de similitude avec l'ADNr 16S de Streptomyces albogriseolus N-40. La méthode « Response Surface Methodology» a été utilisée pour optimiser la production d'antifongiques de la Streptomyces sp. TKJ2. Après extraction, les phases organiques des deux isolats ont subis plusieurs séparations sur colonne Sephadex LH20 et les fractions actives ont été séparées par HPLC (C18) en phase inverse. Une recherche de peptides antifongiques a été réalisée et les masses des peptides ont été déterminées par l'infusion ESI-MS suivie d'une analyse en NanoLC-ESI-MS/MS. Mots clés : Actinobactéries, Streptomyces, Taxonomie, Activité antifongique , RSM, Purification.